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Methoden & mehr
Proteinbiochemie

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Geld sparenIsolierenMolekularbiologie
ProblemlösungenProteinanalytikSignale
Strukturanalyse

Blot

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ReadyTector® – Die all-in-one-Solution für Western Blots art
ReadyTector® ist die all-in-one Detektionslösung für Western Blots. Sie ermöglicht eine schnelle Einschritt-Immundetektion ohne Hintergrund.... mehr
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Western Blots vor intensivem Halogenlicht schützen art
Schützen Sie Ihre Western Blots vor Licht aus Halogenlampen. Halogenlicht inaktiviert Antikörper. Resultat sind blanke Membranen. Zusätzlich gibt’s hier Blot-Tipps für Vegetarier und eine kleine Einführung ins Blotten überhaupt.... mehr
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AptaBodies art
Western Blots mit kurzen DNA-Fragmenten, die hundertmal günstiger sind als Antikörper.... mehr
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Western Blot-Transfersysteme art
Wie Southern- und Northern Blot kann man auch den Western Blot ganz ohne Strom und elektrisches Feld durchführen. Legt man einen Filterpapierstapel auf das puffergetränkte Gel, so transportieren die Kapillarkräfte des Papiers die Pufferflüssigkeit und die darin gelösten Proteine auf die Blotmembran. Beim Semi-Dry-Blotten spannt man das Blotsandwich zwischen zwei Graphitplatten ein und hilft den Proteinen mit einem kräftigen elektrischen Feld auf die Sprünge. ... mehr
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Kürzere Transferdauer beim Semi-Dry-Blotten art
Mit dem „Fast Semi-Dry WesternBlot“ lässt sich die Blotdauer bei Western Blots auf 12 min verkürzen. Wir zeigen, wie Sie damit auch noch Geld sparen.... mehr
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Stripping-Puffer für Western-Blots art
Wenn Antikörper nach dem Western-Blot das Protein nicht mehr rausrücken, hilft Ihnen vielleicht dieser Stripping-Puffer... mehr
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Western Blot trocknen art
Banden auf einem Western-Blot kommen besser heraus, wenn man die Membran trocknet. Pusten, oder fönen, dann schnell fotografieren.... mehr
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"Unblot" im Selbstversuch art
Nicht geklappt hat dieser Unblot-Versuch, obwohl er sich genau an das Rezept hielt.... mehr
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Nachweisgrenzen von Western-Blots art
Wieviel Gesamtprotein muss man auf ein SDS-Gel auftragen um im Western-Blot eine sichtbare Bande zu erhalten? ... mehr
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Strippen und Rehybridisieren von Western Blots art
Wer nicht für jeden Antikörper neu blotten will, der strippt“ seine Western Blots. Hier eine einfache Methode. ... mehr
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Unblot – so geht’s art
Damit die Unblot-Methode funktioniert sollte kein SDS im Gel, die Glasplatten silanisiert sein und die Antikörperkonzentration hoch.... mehr
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Western-Blot – Blocken mit Slim Fast art
Beim Westernblot kann man mit Slim Fast überflüssige Banden blocken, das enthält jede Menge Sojaprotein und riecht auch noch schokoladig.... mehr

Elektrophorese

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Universelle Porengröße statt Stufengel art
Gemeinsames Trennen hoch- und niedermolekularer Proteine im 7,5%igem Trenngel mit 20 minütigem Elektrophorese-Vorlauf. ... mehr
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Trennung von Iso-Proteinen art
Ein cleverer Trick beschleunigt die Trennung von Isoproteinen mittels 2D-Gelelektrophorese und Westernblot – und verbessert die Qualität der erzielten Daten. ... mehr
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Proteinfärbung mit Direkt Rot oder Amido Schwarz art
Färbung der Banden im SDS-PAGE-Gel mit Direkt Rot oder Amido Schwarz ist schneller, als mit Coomassie. In 10 Minuten fertig.... mehr
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Kolloidale Coomassie-Färbung art
Die Kolloidale Coomassie-Färbung ist ähnlich sensitiv wie eine Silberfärbung. Ohne Methanol. Nachweisgrenze bei 1-2 Nanogramm Protein/Bande.... mehr
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Coomassie ohne Alkohol und Essig art
Proteinbanden mit Coomassie, aber ohne Methanol, Ethanol und Essigsäure färben und entfärben. Eine gesundheitlich unbedenkliche Methode.... mehr
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Laemmli-Rezeptur art
Hier ist es, nebst einer kleinen Fachdiskussion über den Zugang zu alten Originalveröffentlichungen: das original Laemmli-Rezept... mehr
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Wie ging sie nochmal, die Lämmli-Rezeptur? art
Hier fragte ein Leser nach der original Laemmli-Rezeptur. In Artikel 104 wurde dem Leser dann geholfen.... mehr
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Nachtrag zur Proteinbestimmung art
Epicoccum nigrum produziert eine Substanz, mit der sich SDS-Gele und Blots färben lassen.... mehr
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Alternativen zur Silberfärbung art
Einige Alternativen zur klassischen Silberfärbung von Gelen werden vorgestellt, die sogar Massenspektrometrie- und Edman-Sequenzierungs-verträglich sind.... mehr
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Billiger & handlicher: Wägeschale fürs Mixen art
Mischen von Proben mit Ladepuffer: Billiger ist als Parafilm, handlicher als eine Multi-Platte und dabei auch noch wiederverwendbar - die Wägeschale... mehr
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Luftblasen in Acrylamid-Gelen eliminieren art
100%iger Alkohol eliminiert Luftbläschen aus Polyamid-Gelen, Nach dem Polymerisieren kann man den Alkohol einfach abgießen... mehr
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Coomassie-Entfärbung in der Mikrowelle art
Das Gel wird in der Coomassie-Lösing in der Mikrowelle erhitzt. Anschließend wird es ebenfalls in dier Mikrowelle entfärbt. Zeitersparnis. ... mehr
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Luftgetrockneten PA-Gele art
Luftgetrocknete Polyacrylamidgele können Sie wieder rehydrieren und so weiterbehandeln als wären sie neu. Viele Tipps zu getrockneten Gelen.... mehr
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Probenaufbereitung für die IEF art
Eine hartnäckige IEF-Legende wird widerlegt: Die Denaturierung der Proben mit 8M Harnstoff führt nicht zu Deamidierung oder Carbamylierung. ... mehr
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Methodenoptimierung art
Raffinierte Kniffe, mit denen die 2D-Elektrophorese noch mehr Kleckse liefert – auch von seltenen Proteinen und bei ungünstigen Bedingungen. ... mehr
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PAGE-Gelschaufel art
Ein gelöchertes Stück Plexiglas mit Stiel hält die Polyacrylamid-Gele in der Färbe/Entfärbewanne fest und verhindert so das zerfleddern der Gele.... mehr
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Isoelektrische Fokussierung - Weg mit dem Öl art
Mineralöl auf den Gelstreifen schützt vor Austrocknen Auskristallisieren von Harnstoff, stört aber die Beladung der Polypeptide mit Dodecylsulfat.... mehr
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Isoelektrische Fokussierung, Teil 2 art
IEF mit immobilisierten Ampholyten sind ein Wendepunkt" in der Proteom-Analyse... mehr
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Isoelektrische Fokussierung, Teil 1 art
die Perfektionierung der isoelektrischen Fokussierung (IEF) in klassischen Freiflußelektrophorese-Geräten... mehr
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Entfärben von Coomassie mit Schaumstoff art
Ein Stück Weichschaumstoff in der Entfärbewanne beschleunigt die Befreiung des Gels vom Coomassie-Farbstoff... mehr
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Entfärben von Coomassie mit Papierhandtuch art
Ein gefaltetes Papierhandtuch in der Entfärbewanne beschleunigt die Befreiung des Gels vom Coomassie-Farbstoff... mehr
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Coomassie-Färbung ohne Methanol art
Proteinbanden mit Coomassie, aber ohne Methanol. Färben mit Isopropanol und Essigsäure. Zum Entfärben nur 10% Essigsäure.... mehr
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Proteingel-Entfärbung per Blot art
Wird ein Coomassie-gefärbtes, SDS-Gel geblottet, wird der ungebundene Farbstoff eluiert, gefärbte Proteine bleiben im Gel.... mehr
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Trocknen von Polyacrylamid-Gelen art
Lufttrocknen Sie Ihr Acrylamid-Gel zwischen Zellophanfopien. Sparen Sie sich Vakuum-Pumpe, Kühlfalle und Trocken-Apparatur.... mehr
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SDS-Anodenpuffer ohne Glycin art
Für die zweite Dimension der 2D-Gelelektrophorese kann man beim Anodenpuffer das Glycin weglassen – ohne Qualitätsverluste.... mehr
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Notched Inner Plates art
Sie können den Durchsatz bei der 2D-Gelelektrophorese mit Notched Inner Plates verdoppeln. Das können Sie auch selber bauen.... mehr
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Proteine (ent-)färben art
Entfärbt man ein Coomassie-Gel mittels Westernblot, besteht die Gefahr dass dabei Banden verschwinden. Hier die Methodik des Blottens.... mehr
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Betrieb von 2D-Gelen bei konstanten Temperaturen art
Durch Schläuche fließt Wasser in mehreren Wendeln durch einen eisgefüllten Styroporblock. Kühlflüssigkeit für die 2D-Gelelektrophorese.... mehr
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Neues Solubilisierungsmittel art
Bei der Auftrennung integraler Membranproteine in 2D-Gelen gehen mit dem Solubilisierungsmittel OBAS wesentlich mehr Proteine in Lösung.... mehr
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Gelkamm mit Silikonpaste art
Gel-Taschen reißen nicht so schnell, wenn Sie den Gel-Kamm nach dem Putzen mit Silikonpaste einreiben. Dann gleitet er leicht aus dem Gel.... mehr
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Coomassie-Entfärbung in 15 min art
Das Gel wird in der Coomassie-Lösing in der Mikrowelle erhitzt. Anschließend wird es ebenfalls in dier Mikrowelle entfärbt. Zeitersparnis. ... mehr

Extraktion

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GTPC-Methode: Verbesserte Protein-Extraktion art
Die Löslichkeit des Protein-Pellets bei der GTPC-Methode wird durch den Einsatz eines Methanol-Chloroform-Wasser-Gemisches stark verbessert.... mehr
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Filter Aided Sample Preparation art
Bei der FASP filtriert man Proteine. Auf der Ultrafiltrationsmembran werden sie dann zu Peptiden verdaut, die die Membran passieren können.... mehr

Geld sparen

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Ersatzteile gießen, z.B. Spacer art
Einfach Plastikteile, wie Spacer nachzukaufen ist teuer. Hier gibt’s einen ebenso einfachen, wie bewährten Trick sich die kleinen Teile selber zu gießen und dabei richtig Geld zu sparen.... mehr
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Gel-Riegel und Mini-Blots art
Geld und Materialsparen durch Portionierung und Teilung von großen Gelen und die Verwendung von Minigelen. Sparsamkeit im Labor.... mehr

Isolieren

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Groß und Klein getrennt im Stufen-Gel art
Proteine unterschiedlicher Größe können im Stufengel sauber getrennt werde. Das ist einfacher und billiger als ein Gradientengel.... mehr
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Top-Down-Proteomics art
Die verbesserte Auftrennung minimiert Proteinverluste und erhält die Struktur der Proteine. ... mehr
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Tandem-Affinitätsreinigung mit Fractogel art
Bei der TAP kann Fractogel EMD eine Alternative zu Sepharose-IgG-Beads sein. Es ist billiger und funktioniert bei manchen Proteinen besser.... mehr
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Isolierung von Membranproteinen art
Neue Methoden zur Trennung von Membranproteinen von löslichen Proteinen.... mehr
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Isolierung von Plasmamembranen art
Zur Isolierung von Plasmamembranen stellen Sie ein Zweiphasensystem aus Dextran und PEG her.... mehr
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Proteinextraktion aus dem PA-Gel art
Mit Ausschneiden, Dialyse und Elektroelution lassen sich Proteine aus PAGE-Banden extrahieren und anschließend weiterverwenden.... mehr

Molekularbiologie

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Zellfreie Proteinsynthese art
Die zellfreie Proteinsynthese kann man ohne Klonierungen und Transformationen durchführen.... mehr

Problemlösungen

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Akustische Pinzette für Proteinkristalle art
Das Bewegen von winzigen Proteinkristallen wird durch SSAW mittels stehenden akustischen Wellen präzise, kristallschonend und sicher.... mehr
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TBS-Stammlösung ohne Feinjustieren des pH-Werts art
Bei eine TBS-Stammlösung mit diesem Rezept hergestelt, muss man anschließend nicht mehr den pH einstellen. Der ist dann schon 7,5.... mehr
Thumb
Unerwünschte Bindung von Peptiden an Reaktionsgefäße art
Proteine adsorbieren unterschiedlich stark an Oberflächen, was zu unerwünschten und unkalkulierbaren Probenverlusten führt.... mehr
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Partikel-basierte Peptidsynthese art
Partikel-basierte Peptidsynthese anschaulich erklärt.... mehr
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Renaturierung von Proteinen art
Wenn Proteine denaturiert sind, kann ein Wiederbelebungsversuch mit der Renaturierungshilfe b-Cyclodextrin helfen.... mehr
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Membranproteine solubilisieren art
Membranproteine sind wählerisch wenn es darum geht, sie in Lösung zu bringen... mehr
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Proteinsequenzierung art
Das zentrale Problem beim Mikrosequenzieren sind blockierte N-terminale Enden... mehr
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Biochemische Routinemethoden, Teil 2 art
Kleine Tricks für altbewährte Labormethoden (SDS-Gelelektrophorese, ELISA, FISH).... mehr
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Wie man Proteine in Lösung bringt art
Wie bekommt man in der Proteomforschung wirklich alle Proteine in Lösung? Vermeintlich „ideale Solubilisierungsbedingungen“ werden geprüft und bewertet.... mehr

Proteinanalytik

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Bradford-Assay mit höherer Empfindlichkeit art
Dieser modifizierte Bradford-Assay ist deutlich empfindlicher als kommerzielle Kits. Entscheidend ist die Einstellung des pH-Wertes... mehr
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Raman-Spektroskopie art
Für Biologen ist die Raman-Spektroskopie interessant, weil sie schnell und nicht-invasiv ist.... mehr
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Aktivitätstest: Succinat-Dehydrogenase art
Einfacher und Zuverlässiger Test der Succinat-Dehydrogenase-Aktivität, dem membranständigen Bindeglied zwischen Zitratzyklus und Atmungskette.... mehr
Thumb
Gel Shift Assay mit gelabeltem Oligo art
Gel Shift Oligos preiswert labeln mit einem dritten Oligo. An ein überhängendes 3´Ende wird ein gelabeltes universelles Oligo gehängt. Gut und billig.... mehr
Thumb
Infrarot fluoreszierender Reporter art
Mit dem infrarot fluoreszierenden Reporter-Protein kann man das Molekulargewicht des IFP-Fusionsproteins im denaturierenden Proteingel ermitteln.... mehr
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Aktivitätsnachweise auf zellwandabbauende Enzyme art
Wie kann man zellwandabbauende Enzyme bei der Arbeit beobachten.... mehr
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Proteinkonzentrationen egalisieren art
Righettis Methode der Hexapeptid-Egalisierung gründet auf der Idee, dass jedes Protein an irgendetwas bindet.... mehr
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Alte Tests in neuem Licht art
Neue Erkenntnisse zum Lowry-Test und zur Plasmid-Präparation. ... mehr
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Analytische Ultrazentrifugation - Molekulargewichtsbestimmung art
Molekulargewichtsbestimmung von Membrabprotein-Komplexen durch Analytische Ultrazentrifugation. Die Glycosylierung der Proteine spielt eine Rolle.... mehr
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Quantifizierung von SH-Gruppen art
Mit diesen Tests lassen sowohl die freien SH-Gruppen als auch die Gesamtzahl der Cysteinreste eine Proteins bestimmen... mehr
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2D-Gel-Bildanalyse mit Turbulenzen art
Eine Software hat Turbulenzen in einem 2D-Gel entdeckt, die sonst keiner sieht. Ansonsten soll „Proteomweaver“ aber ganz ordentlich arbeiten.... mehr
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ECL-Blots hausgemacht art
Ein selbstgemachtes ECL-Detektionsreagenz ist billiger und zeigt auch noch weniger unspezifische Banden als ein gekauftes.... mehr
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Maximale Größe von transgen exprimierten Proteinen art
Welches Molekulargewicht hatte eigentlich das bisher größte Protein, welches in einem Fremdorganismus exprimiert wurde?... mehr
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Proteine, Volumen und Cleavage-Sites art
1. Faustregel zur Berechnung Rauminhalte eines Proteins und 2. Kostenlose Software zum Finden von Protease-Schnittstelen.... mehr
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Messung der Peptid-Konzentration, wenn E280 fehtschlägt? art
Peptidkonzentration messen: BCA-Assay, Bradford, Silberfärbung und Extinktionsmessung bei 214 nm können Alternativen zu 280 nm sein.... mehr
Thumb
PAGE Färbezeit-Indikator art
Vergleichbarkeit von silbergefärbten Banden bei der zweidimensionalen Elektrophorese: zwei äquilibrierte Streifengele mitlaufen lassen.... mehr
Thumb
Protein-Grobbestimmung vor Western-Blots art
Mittels einer Eichreihe mit BSA und Amidoschwarz können Sie mit 1 Mikroliter Proteinextrakt eine Grobbestimmung der Konzentration bekommen.... mehr

Signale

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HaloTag-NAPPA art
Proteinsynthese und gleichzeitige Fixierung direkt auf dem Microarray. So kann man durch Zugabe zu testender Interaktionspartner etwas über mögliche Wechselwirkungen erfahren. Eine schlaue Technik, die aber nicht unkritisch benutzen sollte.... mehr
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Inteine: Die hohe Kunst des Spleißens art
Inteine schneiden sich selbst aus Vorläufer-Proteinen heraus. Forscher nutzen dies zur Proteinreinigung und Analyse von Protein-Protein-Interaktionen.... mehr
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Entfernungen zwischen Biomolekülen messen art
FRET-Systeme dienen als molekulare Lineale, um Entfernungen zwischen Biomolekülen zu messen. Erfahren Sie, wie's funktioniert.... mehr
Thumb
Molekulare Entfernungen und Wechselwirkungen messen art
Mit Fluoreszenzfarbstoffen kann man Entfernungen zwischen Biomolekülen messen und molekulare Wechselwirkungen in Echtzeit verfolgen.... mehr
Thumb
Untersuchung intrazellulärer Signalwege art
Die geschilderte Caged-cAMP-Methode macht intrazelluläre Signalwege in vivo sichtbar. Mit Licht-Impulsen wird dabei die Membranleitfähigkeit gemessen.... mehr

Strukturanalyse

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Der Mechanik von Proteinen auf der Spur art
Das EF-X-Verfahren macht Konformationsänderungen und Bewegungen innerhalb von Proteinen sichtbar... mehr


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