Tipp 103:
Mastermix bei der Real-Time Quantitativen PCR

Aus der Reihe Labortipps aus dem Cyberspace:

Forumsteilnehmer Strider hofft im Bioforum von protocol-online (www.protocol-online.org) auf Hilfe bei der Real-Time PCR.

"Weiß jemand ein Rezept nach dem man den Mastermix bei der Real-Time Quantitativen PCR (RTQ-PCR) selbst herstellen kann?"

Der Tipp aus dem Forum:

"Ich verwende dazu folgende Mischung (Master Mix für 1 RTQ-PCR Reaktion, Gesamtvolumen 25 µl):

13.625 µl H2O (Nuklease frei, PCR-Grade)
2.5 µl 10xPuffer (1x Endkonzentration)
0.5 µl 10 nM dNTP's (Endkonzentration: 0.8 mM )
4 µl 50% Glycerin (Endkonzentrsation: 8%)
0.375 µl Rhodamine X (Endkonzentration: 30 nM)
0.75 µl SYBR Grün (x0.5 Endkonzentration)
0.25 µl Taq DNA Polymerase (2.5U je Reaktion)
1 µl Primer (Endkonzentration 50-150 nM)

2 µl DNA Template hinzugeben.

(Glycerin verdünnt mit Wasser, SYBR Grün vor Gebrauch 1:2000 mit DMSO verdünnen, Rhodamin X vor Gebrauch 1:500 mit Wasser verdünnen.")



Letzte Änderungen: 24.04.2006