Proteine im Batch-Verfahren zu reinigen, erfreut sich großer Beliebtheit, da es einfach und schnell funktioniert, kein besonderes Equipment benötigt wird und dadurch kostengünstig umsetzbar ist. Jedoch sind herkömmliche Agarose-Beads nur bedingt geeignet, da sie leicht aufgewirbelt werden können, schnell von der Pipette aufgesaugt werden und dadurch ein Teil der Probe verloren gehen kann. Zudem kann der Überstand nicht vollständig abgenommen werden, worunter die Reinheit leidet. Magnetische Beads bieten an dieser Stelle einen großen Vorteil, da sie aufgrund ihres magnetischen Kerns mithilfe eines Magneten schnell vom Überstand separiert werden können und so das Aufsaugen während des Pipettierens verhindert wird. Zudem entfallen Zentrifugationsschritte, die bei herkömmlichen Agarose-Beads notwendig sind.

Um Proteine in einer hohen Reinheit zu isolieren, reicht jedoch der magnetische Kern allein nicht aus. An dieser Stelle ist besonders der Ligand an der Oberfläche entscheidend. Dieser muss eine hohe Affinität zu einem spezifischen Affinitäts-Tag aufweisen. Ein Protein, das mit dem Affinitäts-Tag versehen ist, kann dadurch verlässlich am Liganden gebunden werden und von anderen Molekülen separiert werden. Eine solche verlässliche Einheit bietet die Strep-tag®-Technologie mit den MagStrep Strep-Tactin®XT beads, womit sich eine Reinheit von mehr als 95 % erreichen lässt.

MagStrep Strep-Tactin®XT beads bestehen aus einem magnetischen Kern, der von einer 6-%-igen Agarose umhüllt ist. Die Agarose ist mit der Streptavidin-Variante Strep-Tactin®XT beschichtet. Der Durchmesser der Beads beträgt im Schnitt 30 µm. Als Affinitäts-Tags kommen sowohl der Strep-tag®II als auch der Twin-Strep-tag® in Frage, wobei ersterer eine nM-Affinität und letzterer eine pM-Affinität für Strep-Tactin®XT aufweist. Die Interaktion zwischen Strep-tag® und Strep-Tactin®XT ist äußerst spezifisch, wodurch die unerwünschte Reinigung von unspezifischen Proteinen ausbleibt. Aufgrund der milden Reinigungsbedingungen und breiten Reagenzien-Stabilität können Proteine unterschiedlichster Klassen adressiert werden, sowie Enzyme, Metalloproteine, Membranproteine und viele weitere. Auch Protein-Protein-Interkationen können aufgrund dieser Eigenschaften über Pull-down (Immunpräzipitation IP/Co-Immunpräzipitation (Co-IP)) analysiert werden, da die Pufferbedingungen an die Eigenschaften der interagierenden Proteine angepasst werden können. Und falls mehrere Proben gleichzeitig analysiert werden sollen, kann leicht zur Reinigung im 96-Well-Format gewechselt werden.

Spezifikationen der MagStrep Strep-Tactin®XT beads:

• Bindungskapazität von bis zu 1,2 nmol/μl Beads (entspricht 32.4 μg/µl Beads eines 27 kDa Proteins)
• Durchmesser von ca. 30 µm
• Agarose Beschichtung führt zu weniger unspezifischen Bindungen
• Flexible Elution: unter milden, nativen Bedingungen mit Biotin oder unter denaturierenden Bedingungen durch aufkochen in SDS-Probenpuffer
• Hohe Affinität von Strep-Tactin®XT zu Strep-tag®II und sehr hohe zu Twin-Strep-tag®
• Flexibel einsetzbar für Einzel- oder Hochdurchsatz-Reinigung

Neben den magnetischen Beads bietet IBA Lifesciences noch weitere Produkte an, um den gesamten Pfad von der Klonierung über die Expression bis hin zur Reinigung und Analyse von Strep-getaggten Proteinen zu erleichtern. Dazu zählen Klonierungsvektoren für unterschiedlichste Expressionswirte/-systeme, weitere Reinigungsmatrizes in verschiedenen Formaten (FPLC columns, Gravity columns, Spin columns) sowie Detektionsmittel, beschichtete Mikrotiterplatten und Kits für SPR und BLI.

In Summe führen diese Eigenschaften zu sehr guten Reinigungsergebnissen. MagStrep Strep-Tactin®XT beads sind ein praktisches Tool für die Reinigung von hochreinen Proteinen im kleinen Maßstab, wie sie in Pull-Downs, IP’s/Co-IP’s und Hochdurchsatz-Screenings erforderlich sind.

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